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如何延長高效液相色譜柱的使用壽命?
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更新時間：2026-08-30
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1樣品前處理環節
樣品是造成色譜柱污染、柱壓升高最主要的來源。進樣之前樣品必須做前處理，固體顆粒一定要去除，優先采用濾膜過濾，根據色譜柱粒徑選擇對應孔徑濾膜，避免微小顆粒進入柱內部堵塞填料。基質復雜的樣品，需要做固相萃取、沉淀等凈化步驟，減少蛋白、油脂、色素、強保留雜質進入色譜柱。盡量減少高濃度強保留組分進樣，高濃度樣品做合理稀釋，降低填料被不可逆污染的風險。
2流動相的配置要求
流動相所用試劑選用色譜純級別，水相優先使用超純水。水相緩沖鹽溶液務必過濾脫氣，除去顆粒物與氣泡，緩沖鹽濃度不宜過高，防止鹽析出磨損、堵塞色譜柱。有機相和水相混合時，避免鹽直接接觸高比例有機相，防止鹽結晶析出損傷填料。流動相pH嚴格控制在色譜柱允許的pH范圍內，超出耐受區間會破壞硅膠基質鍵合相，造成柱效快速下降。
含有緩沖鹽的流動相，結束測試后不能直接用純有機相沖洗，需要先用高比例水相流動相充分沖洗，把鹽全部沖洗出去，再過渡到高有機相保存。
3進樣操作規范
控制合適的進樣量，不要過載。進樣體積過大、樣品濃度過高，會造成色譜柱過載，峰形變差，同時加重填料負擔。進樣針、定量環定期清洗，避免殘留樣品帶入色譜柱。盡量避免強吸附性的雜質反復進樣，減少不可逆吸附。
4色譜柱沖洗與保存
每次測試結束，按照柱子說明書要求進行沖洗。對于反相C18類色譜柱，如果流動相含有鹽，先水?有機相混合液沖洗除鹽，再使用高比例有機相做保存沖洗。
短期保存，可使用高比例有機相；長期不用，反相柱一般保存在甲醇或者乙腈中，禁止長時間泡在純水、緩沖鹽溶液中，防止硅膠填料水解、長微生物。正相色譜柱要保存在對應正相溶劑體系，禁止接觸大量水。
新色譜柱拿到手，使用對應保存溶劑充分平衡之后再進樣測試。
5控制儀器運行參數
控制合適的流速，不要長時間超過色譜柱允許最大流速。避免壓力驟升驟降，開關泵、切換流動相時，調整流速梯度平緩變化，劇烈壓力沖擊會擠壓破壞填料床層，造成柱塌陷。柱溫不要超過色譜柱最高耐受溫度，高溫會加速鍵合相流失。
系統管路的死體積盡量小，定期檢查管路、進樣閥，防止管路碎屑進入柱子。儀器管路、進樣器定期維護，減少系統污染轉嫁到色譜柱。
6保護柱的合理使用
基質復雜樣品測試，前端加裝匹配的保護柱。保護柱填料和分析柱保持一致，能夠攔截顆粒、強保留污染物，污染物消耗在保護柱上，減少分析柱損傷。保護柱壓力升高、柱效變差之后及時更換，不要等到保護柱失效污染分析柱。
7日常使用注意事項
避免反沖色譜柱，除非說明書明確支持反向沖洗。出現柱壓異常升高，優先排查系統其他部件，不要盲目認定色譜柱損壞。同一根色譜柱盡量固定做一類樣品，不要一根柱子交替測試差異極大的復雜基質。
定期記錄柱壓、柱效、保留時間，建立使用臺賬，出現異常提前干預。如果柱子被污染，可以按照說明書做溫和再生沖洗，再生溶劑、沖洗流速嚴格遵循廠家指引，不可隨意使用強溶劑長時間沖洗。
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